Modi per evitare la contaminazione cellulare: consigli per pipettare che devi conoscere
Tra le molte variabili controllate nella coltura cellulare, una variabile specifica influenza l'intero esperimento: la contaminazione. Un fattore che contribuisce alla contaminazione cellulare non è sempre sul radar e, sebbene possa influire silenziosamente sulla salute delle cellule e sui dati di misurazione, è la contaminazione da pipettaggio.
La scelta delle pipette, dei puntali delle pipette e dei programmi di pipettaggio riceve poca attenzione durante la progettazione degli esperimenti. Anche una soluzione coperta (lavaggio in autoclave) per evitare la contaminazione da pipettaggio potrebbe non essere così efficace come si crede comunemente.
La prima regola della coltura cellulare: evitare la contaminazione. Perché la tecnica sterile è così importante per una coltura cellulare di successo?
La tecnica asettica è l'unico modo per ottenere risultati affidabili e riproducibili. L'inquinamento può influenzare la crescita cellulare, il metabolismo e la salute -- qualcosa che gli scienziati sono interessati a studiare. Le linee cellulari contaminate non hanno le proprietà desiderate e funzionano ogni volta in modo diverso, a seconda della gravità della contaminazione. Inoltre, se i contaminanti crescono troppo nelle tue cellule di interesse, potresti finire per studiare l'organismo sbagliato.
Quali tipi di inquinanti incontrano spesso gli scienziati?
Fonti comuni di contaminazione sono batteri, lieviti e muffe. Nel lavoro di coltura cellulare, il più difficile da rilevare ed eradicare è il micoplasma. I tipi meno comuni di contaminazione includono, ad esempio, i materiali rilasciabili in plastica nei materiali di consumo di laboratorio.
Quali sono le cause comuni della contaminazione cellulare?
Una fonte comune di contaminazione è un pipettaggio scadente, come l'uso di pipette contaminate e puntali senza filtro. Inoltre, anche la mancanza di buone pratiche di laboratorio, come la decontaminazione inadeguata di strumenti come incubatrici o cappe a flusso laminare, è un problema. Per rimuovere il micoplasma, è necessaria la filtrazione utilizzando un filtro 0.1 µm invece di un filtro 0.2 µm.
Tre contaminazioni da pipettaggio:
1. Contaminazione tra pipetta e campione: la pipetta o il puntale della pipetta contamina il campione.
Come evitare:
Utilizzare puntali con filtro sterili per evitare la contaminazione del corpo della pipetta.
Cambiare la punta della pipetta dopo ogni campione.
Autoclavare o sterilizzare regolarmente le pipette con etanolo. Scegli una pipetta compatibile con l'autoclave.
2. Contaminazione da campione a pipetta: Pipettare il campione nel corpo della pipetta contamina la pipetta.
Come evitare:
Utilizzare puntali con filtro o puntali a spostamento positivo per evitare che i campioni entrino nel corpo della pipetta.
Durante il pipettaggio, mantenere la pipetta in posizione verticale. Conservare la pipetta in posizione verticale.
Inclinare la bottiglia durante il pipettaggio.
Rilasciare lentamente il pulsante per evitare di schizzare il campione nella pipetta. Scegli una pipetta dotata di una funzione di espulsione morbida.
3. Contaminazione tra campioni: i campioni di pipettaggio residui vengono trasferiti al campione successivo. Di solito si verifica quando la stessa punta viene utilizzata più volte.
Come evitare:
Cambiare la punta della pipetta dopo ogni campione.
Utilizzare puntali con filtro o puntali a spostamento positivo per evitare che il campione entri nel corpo della pipetta e passi al campione successivo.
Assicurarsi che la punta della pipetta sia sigillata sulla pipetta per evitare perdite di campione. Ad esempio, la punta di Yongyue Medical.
Ci sono fattori di contaminazione di cui gli scienziati potrebbero non essere nemmeno a conoscenza?
L'efficienza dell'autoclave spesso non viene verificata e, se l'autoclave non funziona correttamente, le punte delle pipette autoclavate potrebbero non essere sterili. I filtri pre-sterilizzati avvolti in un imballaggio protettivo sono l'opzione più sicura per prevenire tali incidenti. Il processo di pre-sterilizzazione per puntali per pipette di alta qualità viene regolarmente convalidato per garantire l'efficienza della pre-sterilizzazione.
In che modo gli strumenti di pipettaggio e dispensazione facilitano agli scienziati la manipolazione dei campioni in un ambiente sterile?
La scelta delle pipette e dei puntali per pipette giusti può semplificare il flusso di lavoro asettico. Le pipette mediche Yongyue sono facili da pulire e si aprono senza attrezzi, accelerando la pulizia quotidiana. Poiché la sterilizzazione in autoclave è più efficace nella rimozione della contaminazione rispetto alle salviettine imbevute di etanolo, le pipette meccaniche Sartorius sono completamente autoclavabili, il che significa che potete decontaminare le vostre pipette in modo affidabile. L'espulsione del puntale morbido previene il potenziale rischio di contaminazione da schizzi quando il puntale viene espulso. I puntali con filtro pre-sterilizzati proteggono i campioni dalla contaminazione incrociata. I puntali medici Yongyue sono inoltre confezionati in imballaggi a prova di perdite, il che significa che qualsiasi contaminazione nelle condizioni di conservazione e consegna non entrerà in contatto con i puntali o la scatola dei puntali.
Come possono gli scienziati evitare l'inquinamento? Quali sono i tuoi migliori consigli per il lavoro sterile?
In primo luogo, buone pratiche di laboratorio e un'attenta pianificazione delle fasi di lavoro. Assicurarsi di mantenere solo ciò che è necessario per un flusso di lavoro specifico nell'armadio a flusso laminare e utilizzare una coltura cellulare allo stesso tempo. Inoltre, test regolari per contaminanti come il micoplasma ti danno tranquillità e fiducia nei tuoi risultati. Quando si lavora in condizioni sterili, il denaro speso per puntali con filtro pre-sterilizzati e reagenti sterili vale la pena.