Requisiti di base per la raccolta dei campioni
1. I campioni dei casi ricoverati sono raccolti dal personale medico dell'ospedale in cui si trovano e i campioni dei contatti stretti sono raccolti dall'agenzia locale per il controllo delle malattie e dall'istituzione medica. Quando si raccolgono campioni, devono essere impostate diverse aree di campionamento in base ai diversi oggetti di raccolta. I pazienti con febbre vanno in cliniche per la febbre per il trattamento e il campionamento. Le istituzioni che non dispongono di cliniche per la febbre dovrebbero istituire aree di campionamento speciali per i pazienti con febbre e campioni di pazienti con febbre e altri gruppi di test per evitare l'intersezione. infezione. 2. Le persone infette asintomatiche, il personale di ingresso e i contatti stretti devono raccogliere tamponi nasofaringei per il test dell'acido nucleico durante l'isolamento e l'osservazione. Due campioni di tampone nasofaringeo devono essere raccolti contemporaneamente quando l'isolamento viene rilasciato e devono essere utilizzati rispettivamente diversi reagenti di rilevamento dell'acido nucleico per il test. In linea di principio, il test secondario viene eseguito da diversi istituti di test. 3. In base alle esigenze dei test clinici e di laboratorio, durante il ricovero e l'isolamento possono essere prelevati più campioni e possono essere raccolti contemporaneamente più campioni come tratto respiratorio, sangue e feci. Il personale addetto al campionamento deve seguire rigorosamente le specifiche di campionamento per raccogliere i campioni al fine di garantire che la qualità dei campioni raccolti soddisfi i requisiti. Allo stesso tempo, dovrebbero registrare le informazioni del candidato in dettaglio e possono utilizzare la scansione dei codici a barre e altri metodi di informazione per raccogliere informazioni rilevanti. 4. Per lo screening della popolazione, le provette di campionamento devono essere determinate in base ai requisiti dei reagenti utilizzati per l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici e possono essere selezionate provette di campionamento contenenti agenti inattivanti i virus (sali di guanidina o tensioattivi, ecc.). Il campione utilizzato per l'isolamento del virus deve essere posto in una provetta di campionamento che non contenga agente di inattivazione del virus. 5. Gli elementi e il monitoraggio ambientale dovrebbero essere basati su scopi di monitoraggio e le esigenze di prevenzione e controllo per determinare gli elementi di campionamento, l'ubicazione e la quantità, il campionamento dovrebbe seguire rigorosamente le specifiche di campionamento.
(4) Tipi di campioni raccolti. Ogni caso deve raccogliere campioni del tratto respiratorio acuto (compresi campioni del tratto respiratorio superiore o campioni del tratto respiratorio inferiore). Nei casi più gravi, devono essere raccolti per primi i campioni del tratto respiratorio inferiore; campioni di feci, campioni di sangue intero, campioni di siero e campioni di feci possono essere raccolti in base alle esigenze cliniche. Campione di urina. Articoli e campioni ambientali vengono raccolti secondo i requisiti di monitoraggio.
Tipi di campioni: 1. Campioni del tratto respiratorio superiore: inclusi tamponi nasofaringei, tamponi faringei, ecc. 2. Campioni del tratto respiratorio inferiore: espettorato della tosse profonda, liquido di lavaggio alveolare, liquido di lavaggio bronchiale, aspirato del tratto respiratorio, ecc. 3. Campioni di feci/anale tamponi: dovrebbero essere raccolti circa 10 grammi (la dimensione delle arachidi). Se non è conveniente conservare i campioni di feci, è possibile raccogliere tamponi anali. 4. Campione di sangue: sangue anticoagulante, il volume di raccolta è 5 ml, si consiglia di utilizzare un vaso sanguigno sottovuoto contenente anticoagulante EDTA per raccogliere il sangue. 5. Campioni di siero: cercare di raccogliere campioni di siero doppi durante le fasi acuta e di recupero. Il primo siero deve essere raccolto il prima possibile (preferibilmente entro 7 giorni dall'inizio della malattia) e il secondo siero deve essere raccolto nelle 3-4 settimane successive all'insorgenza della malattia. Il volume di raccolta è di 5 ml e si consiglia di utilizzare una provetta per la raccolta del sangue sottovuoto senza anticoagulante. I campioni di siero vengono utilizzati principalmente per la determinazione degli anticorpi e non per la rilevazione dell'acido nucleico. 6. Campione di urina: raccogliere l'urina di metà mattina, il volume di raccolta è 2~3 ml. 7. Campioni di superficie: inclusi alimenti importati della catena del freddo o merci importate sulle superfici interne ed esterne dell'imballaggio, nonché strumenti di trasporto e conservazione e altre parti che possono essere contaminate dalla raccolta di strisci. 8. Campioni di acque reflue: in base alla distribuzione del sistema di drenaggio dei siti di lavorazione e trattamento dei prodotti congelati importati su larga scala nel porto marittimo, concentrarsi sulla selezione dell'uscita delle acque reflue, della raccolta della rete di tubazioni interna, a valle del flusso di acque reflue o del collegamento con la rete di tubazioni comunale, ecc. Da 2 a 3 punti I bit vengono campionati.
(4) Raccolta e trattamento dei campioni
1. Tampone rinofaringeo: il campionatore sostiene delicatamente la testa della persona da prelevare con una mano e tiene il tampone con l'altra. Il tampone entra nella narice e va in profondità lungo il fondo del passaggio nasale inferiore lentamente. Poiché il passaggio nasale è curvo, non è accettabile. Forza eccessiva per evitare emorragie traumatiche. Quando la punta del tampone raggiunge la parete posteriore della cavità nasofaringea, ruotarla delicatamente per una settimana (in caso di tosse riflessa, rimanere per un po'), quindi estrarre lentamente il tampone e immergere la testa del tampone in 2～3 ml soluzione di conservazione del virus (può anche essere Utilizzare soluzione salina isotonica, fluido di coltura tissutale o tampone fosfato), scartare la coda e avvitare saldamente il tappo.
2. Tampone faringeo: la persona che viene prelevata deve sciacquarsi la bocca con normale soluzione fisiologica e la persona che effettua il prelievo deve inumidire il tampone in soluzione fisiologica sterile (è vietato mettere il tampone nella soluzione di conservazione del virus per evitare che gli antibiotici provochino allergie), e il persona da raccogliere Inclinare leggermente la testa, aprire la bocca e fare un"ah" suono, esponendo le tonsille su entrambi i lati, mettere il tampone sulla base della lingua, pulire le tonsille su entrambi i lati della persona con un po' di forza per almeno 3 volte, quindi pulire su e giù per la faringe posteriore per almeno 3 volte. Quindi, immergere la testa del tampone in una provetta contenente da 2 a 3 ml di soluzione di conservazione del virus (è possibile utilizzare anche soluzione salina isotonica, fluido di coltura tissutale o soluzione tampone fosfato), scartare la coda e avvitare saldamente il tappo della provetta. Il tampone faringeo può anche essere inserito nella stessa provetta del tampone nasofaringeo.
3. Estratto rinofaringeo o estratto del tratto respiratorio: utilizzare un collettore collegato a una pompa a pressione negativa per estrarre il muco dal rinofaringe o estrarre le secrezioni respiratorie dalla trachea. Inserire la testa del collettore nella cavità nasale o nella trachea, attivare la pressione negativa, ruotare la testa del collettore ed estrarre lentamente, raccogliere il muco estratto e sciacquare una volta il collettore con un liquido di campionamento da 3 ml (è possibile utilizzare anche un catetere collegato a una siringa da 50 ml collettore alternativo).
4. Espettorato per la tosse profonda: dopo che il paziente ha avuto una tosse profonda, raccogliere l'espettorato espulso in un tubo di campionamento contenente 3 ml di fluido di campionamento. Se l'espettorato non viene raccolto nel fluido di campionamento, è possibile aggiungere da 2 a 3 ml del fluido di campionamento prima del test oppure è possibile aggiungere un volume uguale di succo digestivo dell'espettorato. La formula della soluzione di conservazione del succo digestivo dell'espettorato è mostrata nella Tabella 1.
Quando si utilizza, diluire la soluzione di conservazione a 50 ml con acqua deionizzata, mescolarla con lo stesso volume di espettorato o fare riferimento alle istruzioni per l'uso del reagente o utilizzare un volume uguale di espettorato con 1 g/L di tampone fosfato contenente proteinasi K per convertire l'espettorato.
5. Liquido di lavaggio bronchiale: inserire la testa del collettore dalla narice o dalla presa tracheale nella trachea (circa 30 cm di profondità), iniettare 5 ml di soluzione salina normale, attivare la pressione negativa, ruotare la testa del collettore e ritirare lentamente, raccogliere il muco estratto, E sciacquare il collettore con la soluzione di campionamento una volta, oppure è possibile utilizzare un catetere pediatrico collegato a una siringa da 50 ml per sostituire la raccolta.
6. Liquido di lavaggio alveolare: dopo l'anestesia locale, inserire il broncoscopio a fibre ottiche attraverso la bocca o il naso attraverso la faringe nel bronco del lobo medio destro o nel segmento linguale del polmone sinistro e picchiettare la sua parte superiore nell'apertura del ramo bronchiale e aggiungerlo lentamente attraverso il foro della biopsia tracheale. Soluzione salina fisiologica batterica, 30-50 ml ogni volta, totale 100-250 ml, non deve superare i 300 ml.
7. Campione di feci: prelevare 1 ml di soluzione di elaborazione del campione, prelevare il campione di feci delle dimensioni di un fagiolo di soia e aggiungerlo alla provetta, soffiare delicatamente e aspirare da 3 a 5 volte, lasciarlo riposare a temperatura ambiente per 10 minuti, centrifugare a 8000 rpm per 5 minuti e assorbire il surnatante. Rilevamento. La soluzione per il trattamento del campione fecale può essere preparata da sola e la formula è mostrata nella Tabella 2.
La soluzione HANK'S o altra soluzione salina isotonica, fluido di coltura tissutale o soluzione tampone fosfato può essere utilizzata anche per dissolvere il campione di feci per preparare una sospensione fecale. Se il paziente ha sintomi di diarrea, prelevare 3~5 ml di campione fecale, pipettare delicatamente per miscelare, centrifugare a 8000 giri/min per 5 minuti e assorbire il surnatante per l'uso.
8. Tampone anale: utilizzare un tampone di cotone sterile per inserirlo delicatamente nell'ano di 3～5 cm, quindi ruotarlo delicatamente, metterlo immediatamente in una provetta di campionamento con tappo a vite esterno da 15 ml contenente 3～5 ml di soluzione di conservazione del virus, scartare la coda, e ruotarlo. Serrare il tappo del tubo.
9. Campioni di sangue: si consiglia di utilizzare provette per la raccolta del sangue sottovuoto contenenti anticoagulante EDTA per raccogliere campioni di sangue da 5 ml. A seconda del tipo di reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici selezionati, utilizzare sangue intero o plasma per l'estrazione degli acidi nucleici. Per separare il plasma, centrifugare il sangue intero a 1500-2000 rpm per 10 minuti e raccogliere il surnatante in una provetta di plastica sterile con tappo a vite.
10. Campione di siero: raccogliere 5 ml di campione di sangue con una provetta per la raccolta del sangue a pressione negativa sotto vuoto, lasciarlo a temperatura ambiente per 30 minuti, centrifugare a 1500-2000 giri/min per 10 minuti e raccogliere il siero in una provetta di plastica sterile con tappo a vite.
11. Campioni di superficie: fare riferimento al metodo raccomandato nel"Specifiche tecniche per il monitoraggio ambientale del nuovo Coronavirus nel mercato del commercio agricolo (Market Trade)" (WS/T776—2021). Dopo che il tampone di campionamento è stato completamente infiltrato con la soluzione di conservazione del virus, applicarlo nuovamente sulla superficie e quindi applicare il tampone. Rimetterlo nel tubo di campionamento e immergerlo, estrarlo e applicare nuovamente il campione, ripetere più di 3 volte. Il campionamento distribuito multipunto viene eseguito su oggetti con grandi superfici.
12. Campioni di liquami: fare riferimento ai metodi raccomandati nel"Specifiche tecniche per il monitoraggio ambientale del nuovo Coronavirus nel mercato del commercio agricolo (Market Trade)" (WS/T776—2021). Quando si preleva un campione di liquami da tampone, immergere il tampone nel liquame adsorbito e rimuovere il tampone. Rimettere il tubo di campionamento in ammollo, estrarlo e immergerlo nuovamente nelle acque reflue, ripetere più di 3 volte ed eseguire un campionamento distribuito multipunto per ciascuna posizione di campionamento delle acque reflue. Quando si raccolgono campioni di acque reflue, utilizzare bottiglie di plastica in polietilene per raccogliere 1L～1,5L di acque reflue. Per la raccolta di acque reflue più grandi di 1,5 litri, è possibile utilizzare secchi di plastica in polietilene o attrezzature speciali di arricchimento per campioni d'acqua in loco. Prima di raccogliere campioni di acque reflue, devono essere miscelati accuratamente e quindi campionati; se il liquame è di difficile miscelazione e si verifica una stratificazione, il campionamento può essere effettuato per strati in base alla proporzione del volume d'acqua di ciascuno strato.
13. Altri materiali: raccogliere secondo i requisiti e le specifiche di progettazione.
(5) Imballaggio del campione
Dopo che i campioni sono stati raccolti, vengono sottoconfezionati nella cabina di sicurezza biologica del laboratorio di sicurezza biologica di secondo livello.
1. Tutti i campioni devono essere collocati in una provetta di raccolta campioni di dimensioni adeguate con un tappo a vite e una guarnizione all'interno, resistente al congelamento, e serrati. Il numero del campione, il tipo, il nome e la data di campionamento sono indicati all'esterno del contenitore. 2. Mettere i campioni sigillati in un sacchetto sigillato, ogni sacchetto è limitato a un campione. I requisiti per l'imballaggio del campione devono soddisfare gli standard corrispondenti delle"Regole tecniche per il trasporto sicuro di merci pericolose per via aerea". 3. Quando si tratta di trasporto di campioni esterni, l'imballaggio a tre strati deve essere effettuato secondo il tipo di campioni e le sostanze infettive di classe A o di classe B.
(6) Conservazione degli esemplari
I campioni utilizzati per l'isolamento del virus e la rilevazione dell'acido nucleico devono essere testati il prima possibile. I campioni che possono essere testati entro 24 ore possono essere conservati a 4°C; i campioni che non possono essere rilevati entro 24 ore devono essere conservati a -70°C oa una temperatura inferiore (in caso contrario- Conservare a 70°C in frigorifero a -20°C). I campioni di siero possono essere conservati a 4°C per 3 giorni e possono essere conservati a lungo al di sotto di -20°C. Biblioteche speciali o contatori speciali dovrebbero essere impostati per conservare i campioni separatamente.
(7) Inviare i campioni per l'ispezione
I campioni devono essere inviati al laboratorio il prima possibile dopo la raccolta e i campioni non devono essere posti a temperatura ambiente (25°C) per più di 4 ore dopo la raccolta. Se è necessario il trasporto a lunga distanza, si consiglia di utilizzare ghiaccio secco e altri metodi di refrigerazione per la conservazione. Evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti durante il trasporto del campione.
1. Invia campioni
Tutti i casi originari o precoci delle epidemie locali scoperte in varie province (regioni autonome e comuni), casi chiave legati all'epidemiologia dei primi casi, casi locali con fonti di infezione sconosciute, casi importati dall'estero, merci importate e relative condizioni ambientali campioni positivi, ecc. Devono essere raccolti almeno 2 campioni in parallelo, uno viene inviato a ciascuna agenzia provinciale di controllo delle malattie per il test, l'altro viene inviato ai Centri cinesi per il controllo e la prevenzione delle malattie per il test e la revisione e un modulo di presentazione del campione è allegato (vedi Appendice 10-1). Nuovi ceppi rappresentativi isolati da varie province dovrebbero essere prontamente inviati ai Centri cinesi per il controllo e la prevenzione delle malattie per la revisione e la conservazione.
2. Trasporto di campioni e ceppi
(1) Il trasporto domestico di nuovi ceppi di coronavirus o altri materiali biologici potenzialmente infettivi è classificato come Classe A e il numero ONU corrispondente è UN2814. L'imballaggio è conforme alla classificazione PI620 del documento ICAO Doc9284"Istruzioni tecniche per il trasporto aereo sicuro di merci pericolose" Requisiti di imballaggio: I campioni ambientali appartengono alla categoria B e il numero ONU corrispondente è UN3373. L'imballaggio soddisfa i requisiti di classificazione PI650 del documento ICAO Doc9284"Regole tecniche per il trasporto aereo sicuro di merci pericolose"; per il trasporto con altri mezzi di trasporto si può fare riferimento agli imballi standard sopra indicati. Il trasporto di nuovi ceppi di coronavirus o altri materiali potenzialmente infettivi deve essere gestito in conformità con le"Regolamenti amministrativi sul trasporto di specie o campioni di microrganismi altamente patogeni (virus) che possono infettare l'uomo" (già Ordinanza Ministero della Salute n. 45) per il"Certificato di permesso di trasporto" .
(2) Trasporto internazionale I campioni o i ceppi del nuovo coronavirus che vengono trasportati a livello internazionale devono essere imballati in modo standardizzato, seguire le procedure pertinenti in conformità con le"Regolamenti sull'amministrazione dei servizi sanitari e la quarantena di ingresso e Uscire dagli articoli speciali" e soddisfare i requisiti nazionali e internazionali pertinenti.
(3) Ricezione e gestione di campioni e ceppi virali. I campioni trasportati per via aerea arrivano all'aeroporto di destinazione e vengono trasportati da veicoli di trasporto professionali all'unità ricevente. I campioni trasportati via terra sono trasportati da veicoli professionali. I trasportatori e i destinatari devono trattare gli esemplari Doppio segno per ricevuta. I campioni e i ceppi del nuovo coronavirus dovrebbero essere gestiti da una persona dedicata, registrare accuratamente la fonte, il tipo, la quantità e il numero di registrazione dei campioni e dei ceppi, adottare misure efficaci per garantire la sicurezza dei ceppi e dei campioni e prevenire rigorosamente uso improprio, uso dannoso, furto e furto. Rapine, smarrimenti, perdite e altri incidenti.
02
Test di laboratorio del nuovo coronavirus
