processo di coltura cellulare di mammifero
Le cellule dei mammiferi passano attraverso il processo di estrazione dei tessuti, coltura primaria e sottocoltura. La sottocoltura può essere suddivisa in coltura di linee cellulari e colture di linee cellulari in base alle condizioni. Ciascun processo è brevemente descritto come segue:
Coltura primaria: dopo che il tessuto è stato rimosso dall'animale, viene tritato, trattato con vari enzimi (solitamente tripsina), agenti chelanti (solitamente EDTA) e metodi meccanici (aspirazione ripetuta e soffiaggio di pipette) e quindi disperso nelle singole cellule, coltivato in un mezzo appropriato che consente alle cellule di sopravvivere, crescere e moltiplicarsi. La coltura cellulare primaria si riferisce generalmente alla coltura cellulare entro 10 passaggi dopo che le cellule sono state rimosse da un animale.
Dopo la coltura cellulare primaria, la divisione cellulare e la riproduzione, la coltura aumenta gradualmente, la crescita riempie lo spazio di coltura e quindi entra in contatto tra loro, provocando l'inibizione del contatto e il tasso di crescita rallenta gradualmente o addirittura si interrompe. Deve essere reinseminato in nuove boccette di cultura per la sottocultura.
Passaggio (passaggio): le cellule primarie vengono estratte dal pallone di coltura, la sospensione cellulare viene preparata e divisa in due o più flaconi di coltura per un'ulteriore coltura, che viene chiamata sottocoltura.
Linea cellulare: Una linea cellulare è una linea cellulare dopo il primo passaggio nella coltura primaria. Se il tempo di sopravvivenza di una linea cellulare è limitato, si parla di linea cellulare finita. Una linea cellulare che acquisisce una capacità riproduttiva illimitata e continua a sopravvivere è chiamata linea cellulare continua o linea cellulare infinita.
Linea cellulare: dalle linee cellulari identificate biologicamente, la popolazione cellulare formata dall'isolamento, coltura o screening di una singola cellula è chiamata linea cellulare. Popolazioni cellulari di forme diverse vengono quindi isolate e coltivate dalla linea cellulare primaria per formare subcloni.
Condizioni di coltura cellulare di mammiferi
Diverse cellule di mammifero richiedono condizioni di coltura di base in ogni fase
1. Ambiente sterile e non tossico: trattamento asettico del mezzo di coltura e di tutte le attrezzature di coltura; aggiunta di antibiotici al mezzo di coltura per prevenire la contaminazione durante il processo di coltura; sostituzione regolare del mezzo di coltura per rimuovere i metaboliti per prevenire danni alle cellule in coltura.
2. Nutrizione: il mezzo sintetico liquido contiene zuccheri, aminoacidi, fattori di crescita, acqua, sali inorganici, oligoelementi, ecc. Di solito è necessario aggiungere componenti naturali come plasma e siero
3. Temperatura e valore di pH adeguati: la temperatura ottimale per le cellule umane e di mammifero è di 36±0.5 gradi. Il valore di pH adatto è 7.2-7.4.
4. Ambiente gassoso: L'ambiente gassoso è generalmente composto da "95 percento di aria più 5 percento di anidride carbonica" gas misto. L'ossigeno è un gas necessario per il metabolismo cellulare e l'anidride carbonica mantiene il pH del mezzo.